Tropomyosin α CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-423481

概要

マウスのTpm1は、トロポミオシンαをコードする。トロポミオシンαはアクチンに結合するコイルドコイルタンパク質で、フィラメント状アクチンを安定化させ、ミオシンのアクチンへのアクセスを調節することでアクトミオシン機能を規定する。トロポミオシンαは、細胞骨格の構築、ストレスファイバー形成、ならびに細胞接着・遊走・メカノトランスダクションを形作る収縮ダイナミクスに寄与する。アクチンフィラメントの構成制御という役割を通じて、TPM1はサルコメアおよび非筋細胞のアクチン再構築を司る経路（Rho GTPase依存的な細胞骨格制御を含む）と交差する。トロポミオシンのアイソフォームバランスの変化や、TPM1依存的なアクチン制御の異常は、筋機能の欠陥や、心筋症および腫瘍細胞の運動性モデルに関連するより広範な細胞骨格の機能不全と関連づけられている。

Tropomyosin α CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるTpm1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Tpm1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Tpm1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Tropomyosin αタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Tropomyosin αシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Tpm1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Tropomyosin αの機能に不可欠なTpm1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Tpm1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Tropomyosin α CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびTropomyosin α CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Tpm1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Tropomyosin α HDRプラスミド（m）および Tropomyosin α HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはTpm1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のTpm1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。