TrkB Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-421983
- alvos específicos: mouse
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- TrkB O Plasmídeo CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) é um conjunto de plasmídeos, cada um codificando a nuclease Cas9 e um RNA guia (gRNA) de 20 nt específico para o alvo, concebido para uma eficiência máxima de knockout utilizando sequências derivadas da biblioteca GeCKO v2
- As sequências de gRNA direcionam a Cas9 para induzir quebras de cadeia dupla (DSBs) específicas do local no locus genómico TrkB, resultando no knockout do gene através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ)
- Os genes de resistência à puromicina e RFP são flanqueados por sítios LoxP, permitindo a remoção de marcadores de seleção através da recombinase Cre (Cre Vector: sc-418923) após o estabelecimento de linhas celulares knockout estáveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:TrkB Anticorpo (F-1): sc-377218
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
TrkB Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-421983 | 20 µg | $397.00 |
Visão geral
Ntrk2 codifica a tirosina-quinase receptora TrkB, um recetor de alta afinidade para o BDNF e o NT-4/5 que regula a sobrevivência neuronal, a diferenciação e a plasticidade sináptica. Após a ligação do ligando, o TrkB ativa as cascatas de sinalização canónicas PI3K–AKT, MAPK/ERK e PLCγ–Ca²⁺, que fazem a ponte entre sinais extracelulares de neurotrofinas e programas transcricionais e do citoesqueleto. A sinalização dependente de TrkB influencia o crescimento de neuritos, a remodelação de espinhas dendríticas e o refinamento de circuitos dependente da atividade no sistema nervoso em desenvolvimento e no adulto. Alterações na atividade da via Ntrk2/TrkB têm sido associadas a fenótipos do neurodesenvolvimento e neuropsiquiátricos, bem como a processos neurodegenerativos, sustentando a sua ampla relevância em modelos de doença centrados em mecanismos.
O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO TrkB (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Ntrk2 em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Ntrk2, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.
O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Ntrk2 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína TrkB.
Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Ntrk2 para a investigação da sinalização de TrkB, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.
Características principais
- sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Ntrk2 críticos para a função TrkB
Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
Repórter GFP para identificação de células transfectadas
Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Ntrk2 para melhorar a eficiência do knockout
Compatível com administração por transfecção
Variantes de Design
CRISPRs +/- HDRs
- Os gRNAs codificados pelo TrkB Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo TrkB Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Ntrk2. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
As construções doadoras HDR codificadas pelo TrkB Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR TrkB (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Ntrk2 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Ntrk2 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.