Plásmido Doble Nickase (h) TRIM5α: sc-409348-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)TRIM5α consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa TRIM5α (h) y el plásmido de doble nickasa TRIM5α (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a TRIM5. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) TRIM5α | sc-409348-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) TRIM5α | sc-409348-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
TRIM5 (TRIM5α) es una ligasa E3 de ubiquitina con motivo tripartito inducible por interferón que actúa como un factor de restricción intrínseco frente a la infección por retrovirus al reconocer las cápsides entrantes y desencadenar un desencapsidamiento prematuro. A través de su actividad de ubiquitinación dependiente del dominio RING y de su ensamblaje en redes de orden superior, TRIM5α activa señales de la inmunidad innata, incluidas las vías de NF-κB y AP-1, y se relaciona con el control de calidad proteica asociado al proteasoma y a la autofagia. TRIM5α también participa en el reconocimiento citosólico de patrones y contribuye a moldear programas transcripcionales inflamatorios tras el desafío viral. La variación o la regulación alterada de TRIM5 se ha estudiado en el contexto de la susceptibilidad a la replicación retroviral, la capacidad de respuesta inmune antiviral y una desregulación más amplia de la señalización inmunitaria innata relevante para modelos de enfermedades inflamatorias.
TRIM5α El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus TRIM5 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de TRIM5. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de TRIM5. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con TRIM5 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.