Plasmide CRISPR/Cas9 KO TRIM44 (h): sc-412330

Présentation

TRIM44 (tripartite motif containing 44) code une protéine de la famille TRIM impliquée dans la régulation, dépendante de l’ubiquitine, de la stabilité des protéines et de la signalisation. Bien qu’atypique par sa composition en domaines par rapport à de nombreuses ligases E3 TRIM, TRIM44 a été associée à la modulation des réseaux de protéostasie et de la signalisation en réponse au stress, influençant des processus tels que la croissance cellulaire, la survie et la motilité. Une expression dérégulée de TRIM44 a été rapportée dans plusieurs types de tumeurs et est fréquemment associée à des phénotypes plus invasifs ainsi qu’à une activité de voies altérée, notamment des voies de signalisation liées à PI3K/AKT et à NF-κB. Ces propriétés font de TRIM44 une cible utile pour des études mécanistiques de la régulation liée à l’ubiquitine, du dialogue entre voies de signalisation et de la signalisation oncogénique dépendante du contexte.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO TRIM44 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène TRIM44 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du TRIM44, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert TRIM44 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine TRIM44.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en TRIM44 pour l'étude de la signalisation de TRIM44, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de TRIM44 essentiels à la fonction de TRIM44
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de TRIM44 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le TRIM44 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le TRIM44 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus TRIM44. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le TRIM44 plasmide HDR (h) et le TRIM44 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie TRIM44 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles TRIM44 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.