TRIM10 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-422691

概要

マウスTRIM10（Trim10）は、ユビキチン依存的なタンパク質安定性の制御やシグナル伝達複合体のターンオーバーに関与するとされる、トリパルタイトモチーフ含有E3ユビキチンリガーゼをコードしています。TRIMファミリータンパク質は一般に、ユビキチン化およびプロテオスタシスの調節を介して、自然免疫シグナル、ストレス応答、ならびに細胞骨格や分化関連プロセスの制御に関与します。造血の文脈では、TRIMタンパク質は系譜決定や成熟プログラムと結び付けられることが多く、Trim10は赤血球系に関連する制御ネットワークや、より広範な免疫細胞生物学を研究するうえで注目されています。ユビキチン経路活性の破綻は炎症性疾患や血液疾患の機序に繰り返し見られる特徴であり、関連するマウスモデルにおける経路依存性を検証するためにTrim10を攪乱することの有用性が示唆されます。

TRIM10 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるTrim10遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Trim10内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Trim10のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、TRIM10タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、TRIM10シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Trim10欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• TRIM10の機能に不可欠なTrim10エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Trim10ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• TRIM10 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびTRIM10 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Trim10遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  TRIM10 HDRプラスミド（m）および TRIM10 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはTrim10ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のTrim10標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。