TRH-R1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m2): sc-423506-KO-2
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- TRH-R1 El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m2) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico TRH-R1, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
TRH-R1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m2) | sc-423506-KO-2 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
Trhr codifica el receptor 1 de la hormona liberadora de tirotropina (TRH-R1), un GPCR de clase A que se une a la TRH hipotalámica para regular la señalización del eje hipófisis–tiroides y el control neuroendocrino del metabolismo. Tras la unión del ligando, TRH-R1 se acopla principalmente a Gq/11 para activar la fosfolipasa C, lo que impulsa la producción de IP3/DAG, la movilización de Ca2+ intracelular y programas transcripcionales dependientes de la proteína quinasa C. En el ratón, la señalización de TRH-R1 también se integra con las vías MAPK/ERK e influye en la excitabilidad y la secreción hormonal en tejidos sensibles a la TRH. La desregulación de la señalización TRH–TRH-R1 se ha vinculado con alteraciones en la dinámica de la hormona estimulante de la tiroides y con fenotipos endocrinos y metabólicos más amplios, lo que respalda su uso en estudios mecanísticos de la homeostasis neuroendocrina.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO TRH-R1 (m2) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Trhr en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Trhr junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Trhr tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína TRH-R1.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Trhr para la investigación de la señalización de TRH-R1, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de Trhr críticos para la función de TRH-R1
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Trhr para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido TRH-R1 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido TRH-R1 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Trhr. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR TRH-R1 (m) y el plásmido HDR TRH-R1 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Trhr para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Trhr definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.