Partículas Lentivirales de Activación (h) TRF2: sc-401289-LAC

TERF2 codifica el factor 2 de unión a repeticiones teloméricas (TRF2), un componente central del complejo shelterina que se une al ADN telomérico de doble cadena para preservar la integridad de los extremos cromosómicos. TRF2 suprime la señalización aberrante de daño en el ADN dependiente de ATM y la unión de extremos no homóloga clásica en los telómeros, evitando así las fusiones teloméricas de extremo a extremo y manteniendo la estabilidad del genoma durante la replicación. Mediante la coordinación de la formación del bucle telomérico (T-loop) y la replicación telomérica, TRF2 influye en la progresión del ciclo celular, la capacidad replicativa y los programas de senescencia. La desregulación de la función de TERF2/TRF2 se ha implicado en la disfunción telomérica, la inestabilidad cromosómica y respuestas alteradas al daño en el ADN, aspectos relevantes para estudios de biología del cáncer, envejecimiento y trastornos de mantenimiento del genoma relacionados con los telómeros.

Las partículas de activación lentiviral TRF2 (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de TERF2 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral TRF2 (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción TERF2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de TRF2. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo TERF2 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.