TRF2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-423340

概要

マウスTerf2は、テロメア反復配列結合因子2（TRF2）をコードしており、二本鎖テロメアDNAに結合してtループ形成を促進し、染色体末端を保護するシェルテリン複合体の中核構成要素です。TRF2は、ATM依存的DNA損傷応答の不適切な活性化を抑制し、テロメアでの非相同末端結合（NHEJ）を防ぐことで染色体の端‐端融合を抑え、ゲノム安定性と正確な細胞周期進行を支えます。TRF2機能の破綻は、テロメアのキャップ機能喪失、複製ストレス、染色体異常を引き起こし、老化生物学、幹細胞の枯渇、腫瘍形成研究に関連する過程として重要です。そのためTerf2は、テロメア維持経路や、テロメア・DNA修復・チェックポイントシグナル伝達の相互作用を解析するための指標として広く用いられています。

TRF2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるTerf2遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Terf2内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Terf2のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、TRF2タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、TRF2シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Terf2欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• TRF2の機能に不可欠なTerf2エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Terf2ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• TRF2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびTRF2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Terf2遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  TRF2 HDRプラスミド（m）および TRF2 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはTerf2ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のTerf2標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。