Plásmido CRISPR de Activación (h) TREX-1: sc-403875-ACT

El gen humano **TREX1** codifica **TREX-1**, una exonucleasa de ADN 3′→5′ que degrada ADN citosólico de cadena sencilla y de doble cadena para mantener la homeostasis del genoma y de la inmunidad innata. Al eliminar especies anómalas de ADN generadas durante el estrés replicativo, la reparación del ADN y la actividad de retroelementos, TREX-1 limita la activación de vías de detección de ácidos nucleicos como **cGAS–STING** y la señalización posterior de **interferón tipo I**. La actividad desregulada de TREX1 se asocia con una señalización inflamatoria inapropiada y con respuestas alteradas al daño del ADN, lo que la convierte en un nodo clave que conecta el metabolismo del ADN con los mecanismos de defensa antiviral. Por ello, TREX-1 se estudia ampliamente en contextos de patología impulsada por interferón, fenotipos asociados a autoinmunidad y mecanismos que moldean las respuestas celulares al ADN endógeno y exógeno.

TREX-1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de TREX1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

TREX-1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus TREX1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional TREX1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de TREX-1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo TREX1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de TREX-1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía TREX-1 en células tumorales con expresión de TREX1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.