Plásmido Doble Nickase (h) TREM-2: sc-401585-NIC

TREM2 codifica el receptor desencadenante expresado en células mieloides 2 (TREM-2), un inmunorreceptor expresado principalmente por la microglía y otros macrófagos tisulares, que modela la vigilancia inmunitaria innata y las respuestas homeostáticas. Mediante el acoplamiento a adaptadores como TYROBP/DAP12, la señalización de TREM-2 activa vías dependientes de SYK para regular la fagocitosis, la detección de lípidos, la supervivencia celular y la modulación de programas de citocinas inflamatorias. TREM-2 influye en los estados de activación de la microglía, la eliminación de detritos y las respuestas a la patología neurodegenerativa, y su alteración genética o funcional se ha vinculado con cambios en el riesgo y la progresión de trastornos como la enfermedad de Alzheimer y otras demencias. En compartimentos mieloides periféricos, TREM-2 también contribuye a fenotipos de macrófagos relevantes para la inflamación crónica y la remodelación tisular.

TREM-2 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus TREM2 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de TREM2. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de TREM2. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con TREM2 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.