Particules Lentivirales d'Activation (m) TRB-3: sc-432803-LAC

Le gène Trib3 de la souris code TRB-3, une pseudokinase catalytiquement inactive qui agit comme échafaudage inductible par le stress et module la signalisation intracellulaire. TRB-3 est couramment associée à la régulation de la voie insuline/IGF–PI3K–AKT via des interactions protéine–protéine, influençant en aval le métabolisme du glucose, la survie cellulaire, l’autophagie et les programmes transcriptionnels lors du stress du réticulum endoplasmique (RE) et de la privation en nutriments. Elle s’inscrit également dans des réseaux inflammatoires et de réponse au stress, notamment la signalisation de la réponse aux protéines mal repliées (UPR) pilotée par ATF4/CHOP, ainsi qu’une activité MAPK et NF-κB dépendante du contexte. Une expression altérée de TRB-3 a été associée à des dérégulations métaboliques, à des processus de fibrose et d’inflammation, et à des phénotypes de stress adaptatif tumoral, faisant de Trib3 une cible pertinente pour des études mécanistiques dans des modèles de biologie cardiométabolique et du cancer.

Les particules d'activation lentivirales TRB-3 (m) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de Trib3 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales TRB-3 (m) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription Trib3, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de TRB-3. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif Trib3 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.