TRB-1 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-405781-ACT

Humanes TRIB1 (TRB-1) ist eine katalytisch inaktive Pseudokinase, die als Gerüstprotein (Scaffold) wirkt und Signaltransduktion sowie Proteinumsatz reguliert – insbesondere über Interaktionen mit MAPK-Modulen und Ubiquitin-Ligasen wie COP1. Durch die Modulation phosphorylierungsabhängiger Signaloutputs und der Stabilität zentraler transkriptioneller Regulatoren beeinflusst TRIB1 Zellproliferation, Differenzierung und stressresponsive Programme. TRIB1-abhängige Netzwerke sind an der Immun- und Entzündungsregulation sowie an der Homöostase des Lipidstoffwechsels beteiligt, und eine dysregulierte Expression wurde mit der Biologie hämatologischer Malignome und kardiometabolischen Krankheitsmerkmalen in Verbindung gebracht. Diese Eigenschaften machen TRIB1 zu einem nützlichen Ziel, um die Verschaltung von Signalwegen und die Kontrolle transkriptioneller Zustände in humanen Zellmodellen zu untersuchen.

TRB-1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen TRIB1-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

TRB-1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des TRIB1-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der TRIB1-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen TRB-1-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native TRIB1-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von TRB-1-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des TRB-1-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem TRIB1-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.