TRB-1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-405781-ACT

ヒトTRIB1（TRB-1）は、触媒活性を持たない擬似キナーゼであり、シグナル伝達やタンパク質分解回転を制御する足場（スキャフォールド）として機能します。特に、MAPKモジュールやCOP1などのユビキチンリガーゼとの相互作用を介して作用します。リン酸化依存的なシグナル出力や主要な転写制御因子の安定性を調節することで、TRIB1は細胞増殖、分化、ストレス応答プログラムに影響を与えます。TRIB1依存性ネットワークは免疫・炎症制御および脂質代謝の恒常性維持に関与し、発現の異常は血液悪性腫瘍の病態や心血管代謝疾患関連形質との関連が報告されています。これらの特性により、TRIB1はヒト細胞モデルにおける経路ネットワークの配線（パスウェイ・ワイヤリング）や転写状態制御を解析するための有用な標的となります。

TRB-1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性TRIB1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

TRB-1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における TRIB1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はTRIB1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性TRB-1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のTRIB1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるTRB-1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびTRIB1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるTRB-1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。