TRAP95 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-405827

概要

MED16はTRAP95をコードしており、TRAP95は、配列特異的転写因子とRNAポリメラーゼIIをつなぎ、刺激依存的な遺伝子発現を協調的に制御するメディエーター複合体の必須サブユニットである。TRAP95は、細胞周期制御、分化、ストレス応答性シグナル伝達に関連する転写制御プログラムに寄与しており、プロモーターやエンハンサーで複数の上流経路を統合する役割を反映している。MED16の異常を含むメディエーター機能の改変は、がんやその他の細胞同一性・恒常性の破綻に関わる疾患でみられる広範な転写異常と関連付けられている。ヒトの核内調節タンパク質として、TRAP95は転写ネットワークへの寄与や、クロマチン関連の遺伝子発現制御における役割を中心に研究されている。

TRAP95 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるMED16遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、MED16内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、MED16のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、TRAP95タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、TRAP95シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、MED16欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• TRAP95の機能に不可欠なMED16エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、MED16ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• TRAP95 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびTRAP95 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、MED16遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  TRAP95 HDRプラスミド（h）および TRAP95 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはMED16ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のMED16標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。