TRAP100 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-417318

概要

MED24はTRAP100をコードしており、TRAP100はMediator複合体の必須サブユニットの一つである。Mediator複合体は、配列特異的転写因子とRNAポリメラーゼIIを橋渡しし、プロモーター‐エンハンサー間のコミュニケーションと転写開始を協調的に制御する。TRAP100は、核内受容体によって駆動される転写を含むシグナル依存的な遺伝子制御プログラムに寄与し、さらにクロマチンに関連したより広範な制御を通じて、細胞周期の進行、分化、ストレス応答を調節する。MED24を含むMediatorサブユニットの破綻は、発生異常やがんにおける転写ネットワークの再配線に結び付く転写ネットワークを攪乱し得るため、MED24は遺伝子発現の経路レベルの制御を研究するうえで有用な結節点となる。したがってMED24/TRAP100の機能は、がん生物学をはじめ、遺伝子制御回路の変化に起因する他の疾患における転写制御異常の解明に関連する。

TRAP100 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるMED24遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、MED24内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、MED24のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、TRAP100タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、TRAP100シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、MED24欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• TRAP100の機能に不可欠なMED24エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、MED24ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• TRAP100 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびTRAP100 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、MED24遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  TRAP100 HDRプラスミド（h）および TRAP100 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはMED24ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のMED24標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。