Plasmide CRISPR d'Activation (h) TRAF2: sc-400361-ACT

TRAF2 (facteur associé au récepteur du TNF 2) est une protéine adaptatrice et une ligase E3 de l’ubiquitine qui couple des membres de la superfamille des récepteurs du TNF à la signalisation en aval, modulant les réponses inflammatoires et au stress. En coordonnant des événements d’ubiquitination liés à K63, TRAF2 favorise l’activation des voies NF-κB et MAPK et contribue au contrôle de l’apoptose et de la nécroptose via un dialogue avec des complexes dépendants de RIPK1. TRAF2 influence également la signalisation de l’immunité innée et des récepteurs de reconnaissance des motifs, et peut moduler la dynamique de JNK et de NF-κB non canonique par la régulation de la stabilité de NIK. Une signalisation TRAF2 dérégulée a été associée à une homéostasie immunitaire altérée, une inflammation chronique et des programmes de signalisation oncogéniques dans de multiples contextes pathologiques, ce qui en fait un nœud utile pour des études mécanistiques des circuits de signalisation du TNF.

TRAF2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de TRAF2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

TRAF2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus TRAF2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription TRAF2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de TRAF2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus TRAF2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de TRAF2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie TRAF2 dans les cellules tumorales présentant une expression de TRAF2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.