TRAC-1 Lentiviral Activation Particles (h): sc-409980-LAC

RNF125 kodiert TRAC-1, eine RING-Typ-E3-Ubiquitin-Ligase, die Immunsignale moduliert, indem sie den ubiquitinabhängigen Umsatz und die Aktivität zentraler Signalproteine steuert. TRAC-1 wird mit der Regulation von T‑Zell-Rezeptor- und zytokinvermittelten Signalwegen in Verbindung gebracht und prägt über Proteostase sowie nachgeschaltete Transkriptionsprogramme Aktivierungsschwellen, Lymphozytenproliferation und entzündliche Effekte. Durch die Beeinflussung der Ubiquitinierungsdynamik kann RNF125 zelluläre Antworten der angeborenen und adaptiven Immunität verändern, einschließlich interferonassoziierter Signalübertragung. Eine fehlregulierte RNF125/TRAC-1-Aktivität wurde mit Immundysfunktion und Mechanismen entzündlicher Erkrankungen assoziiert und ist daher relevant für die Analyse von Signalkreisläufen in humanen Immun- und immunnahen Zellmodellen.

TRAC-1 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente RNF125-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

TRAC-1 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der RNF125-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen TRAC-1-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen RNF125-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.