Plásmido CRISPR de Activación (h) TRα: sc-401475-ACT

THRA codifica el receptor alfa de la hormona tiroidea (TRα), un receptor nuclear activado por ligando que se une a elementos de respuesta a la hormona tiroidea para regular programas de transcripción que controlan el metabolismo celular, la proliferación, la diferenciación y el desarrollo. La señalización de TRα se integra con la remodelación de la cromatina dependiente de corre­guladores e interactúa con vías que gobiernan la función mitocondrial, el control del ciclo celular y la expresión génica específica de tejido. La actividad desregulada del receptor de hormona tiroidea y las alteraciones en la expresión de THRA se han asociado con anomalas del desarrollo y fenotipos relacionados con el sistema endocrino, y los programas de transcripción dependientes de TRα se estudian con frecuencia en contextos como la biología cardíaca, esquelética y neural. Como nodo de factor de transcripción, THRA también se utiliza para investigar redes génicas sensibles a hormonas y mecanismos epigenéticos de regulación génica en células humanas.

TRα El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de THRA sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

TRα El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus THRA en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional THRA, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de TRα. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo THRA y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de TRα en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía TRα en células tumorales con expresión de THRA silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.