Particules Lentivirales d'Activation (h) TPPP3: sc-405113-LAC

TPPP3 (membre 3 de la famille des protéines favorisant la polymérisation de la tubuline) code une protéine associée aux microtubules, impliquée dans la régulation de la polymérisation des microtubules, l’organisation du cytosquelette et le transport intracellulaire. En agissant sur la dynamique des microtubules, TPPP3 peut influencer des processus tels que le fonctionnement du fuseau mitotique, la polarité cellulaire et la motilité, étroitement liés au contrôle du cycle cellulaire et aux programmes de différenciation épithéliale. Une expression altérée de TPPP3 a été rapportée dans plusieurs contextes de cancer, ce qui soutient son intérêt comme marqueur moléculaire pour étudier l’état des cellules tumorales, leur prolifération et le remodelage du cytosquelette. Ces caractéristiques font de TPPP3 une cible pertinente pour l’étude des voies dépendantes des microtubules et des changements de phénotype dans des modèles cellulaires humains.

Les particules d'activation lentivirales TPPP3 (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de TPPP3 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales TPPP3 (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription TPPP3, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de TPPP3. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif TPPP3 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.