Partículas Lentivirales de Activación (h) TPCN1: sc-404943-LAC

TPCN1 (canal de dos poros 1; TPC1) codifica un canal catiónico endolisosomal que media la liberación de Ca²⁺ dependiente de NAADP desde orgánulos ácidos, coordinando microdominios locales de calcio que modelan el tráfico vesicular, la dinámica endosoma–lisosoma y la excitabilidad de la membrana. Al acoplar el flujo iónico al potencial de membrana del orgánulo y a la señalización dependiente del pH, TPCN1 influye en procesos como la autofagia, la clasificación de la carga endocítica y el reciclaje de receptores. La actividad de TPCN1 se entrecruza con redes de señalización dependientes de calcio y vías de detección de nutrientes que regulan las respuestas al estrés celular y el metabolismo. La desregulación del manejo de calcio endolisosomal y de los programas de tráfico asociados a TPCN1 se estudia en contextos que incluyen neurodegeneración, fenotipos pigmentarios y metabólicos, e invasión y migración asociadas al cáncer.

Las partículas de activación lentiviral TPCN1 (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de TPCN1 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral TPCN1 (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción TPCN1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de TPCN1. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo TPCN1 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.