Plasmide CRISPR d'Activation (h) TP53INP1: sc-402835-ACT

TP53INP1 (protéine nucléaire 1 induite par la protéine tumorale p53) est une protéine nucléaire sensible au stress, induite par p53 et par des programmes transcriptionnels apparentés lors de dommages à l’ADN et de stress oxydant. Elle module le contrôle du cycle cellulaire, l’apoptose et l’autophagie via des interactions qui influencent les sorties transcriptionnelles dépendantes de p53 ainsi que des réseaux plus larges d’adaptation au stress. Une expression altérée de TP53INP1 a été associée à une dérégulation de la signalisation du stress, ainsi qu’à des voies de prolifération et de survie fréquemment perturbées en cancérologie et dans des contextes inflammatoires. En tant que régulateur nodal des réponses cellulaires au stress, TP53INP1 est couramment étudiée pour son impact sur la régulation des points de contrôle, l’intégrité mitochondriale et la reprogrammation transcriptionnelle en conditions génotoxiques.

TP53INP1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de TP53INP1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

TP53INP1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus TP53INP1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription TP53INP1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de TP53INP1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus TP53INP1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de TP53INP1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie TP53INP1 dans les cellules tumorales présentant une expression de TP53INP1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.