TorsinB CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-407379

概要

TOR1Bは、小胞体および核周囲腔に局在するAAA+ ATPaseであるTorsinBをコードしており、タンパク質の品質管理と核膜構造の維持に寄与します。TorsinBは、小胞体（ER）恒常性、膜リモデリング、核膜孔複合体の生合成制御に関連する過程に関与し、しばしば他のtorsinファミリー分子と機能的に重複して働きます。Torsinを介した経路が破綻すると、核―細胞骨格カップリングや細胞ストレス応答が乱れ得るため、TOR1Bは神経機能や運動障害の生物学を研究するうえで重要な遺伝子です。ER―核膜インターフェースで機能するヒト遺伝子として、TOR1Bはプロテオスタシス、メカノトランスダクション、オルガネラの完全性を検討するモデルでしばしば解析されています。

TorsinB CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるTOR1B遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、TOR1B内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、TOR1Bのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、TorsinBタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、TorsinBシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、TOR1B欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• TorsinBの機能に不可欠なTOR1Bエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、TOR1Bゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• TorsinB CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびTorsinB CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、TOR1B遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  TorsinB HDRプラスミド（h）および TorsinB HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはTOR1Bホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のTOR1B標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。