Topo IIIβ CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-423472

概要

Top3bはDNAトポイソメラーゼIIIβ（Topo IIIβ）をコードしており、ゲノム維持の過程で生じるトポロジカルストレスや組換え中間体を解消するI型Aトポイソメラーゼです。マウス細胞では、Topo IIIβはDNA修復、複製に伴うストレス応答、RNA代謝の制御といった役割を通じて核酸の完全性維持に関与すると考えられており、DNAとRNAの両方を基質として作用できる性質とも整合します。これらの機能は、転写と複製の衝突や組換えに依存したゲノム安定性を制御する経路と交差しており、細胞恒常性に影響を与える過程に関与します。Top3b依存的な核酸プロセシングの破綻は、ゲノム不安定性の表現型と関連づけられており、モデル系における神経発生やがん関連メカニズムの研究においても重要性があります。

Topo IIIβ CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるTop3b遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Top3b内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Top3bのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Topo IIIβタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Topo IIIβシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Top3b欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Topo IIIβの機能に不可欠なTop3bエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Top3bゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Topo IIIβ CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびTopo IIIβ CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Top3b遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Topo IIIβ HDRプラスミド（m）および Topo IIIβ HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはTop3bホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のTop3b標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。