Topo IIIα CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-423471

概要

Top3a は DNA トポイソメラーゼ III α（Topo IIIα）をコードしており、これは IA 型トポイソメラーゼの一種として、複製および修復の過程で生じる DNA のトポロジー的ストレスや組換え中間体の解消に関与します。マウス細胞では、Topo IIIα は BLM、RMI1、RMI2 とともに BTRR 複合体を形成し、二重ホリデイジャンクションの解消（dissolution）を触媒することで、交差（クロスオーバー）イベントを抑制し、正確なゲノム維持を促進します。この活性により、Topo IIIα は相同組換え、複製フォークの安定化、姉妹染色分体の分離といった経路と関連づけられます。TOP3A に関連するプロセスの破綻はゲノム不安定性の表現型と結びついており、哺乳類系におけるがん生物学、発生異常、DNA 修復疾患の研究において重要な意味を持ちます。

Topo IIIα CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるTop3a遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Top3a内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Top3aのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Topo IIIαタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Topo IIIαシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Top3a欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Topo IIIαの機能に不可欠なTop3aエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Top3aゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Topo IIIα CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびTopo IIIα CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Top3a遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Topo IIIα HDRプラスミド（m）および Topo IIIα HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはTop3aホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のTop3a標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。