Topo IIβ CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400773-ACT

TOP2Bは、ヒトDNAトポイソメラーゼIIβ（Topo IIβ）をコードしている。Topo IIβはATP依存性酵素であり、転写やクロマチンリモデリングの過程で一過性の二本鎖切断を形成してDNAを再ライゲーションすることで、DNAのスーパーコイルやカテネーション（絡み合い）を解消する。Topo IIβはゲノム構造の維持と長距離の遺伝子制御を支え、RNAポリメラーゼII依存的な転写プログラムに寄与するとともに、ゲノム安定性の維持にも関与する。その活性は、DNA損傷応答シグナル、細胞周期に連動したトポロジー制御、分化に伴う転写スイッチと交差している。TOP2Bの機能または発現の異常は、転写景観の変化、ゲノム不安定性の表現型、疾患に関連するストレス応答と関連づけられており、がん生物学、神経生物学、ならびに心毒性機序の研究で注目されている。

Topo IIβ CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性TOP2Bの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Topo IIβ CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における TOP2B 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はTOP2B転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Topo IIβの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のTOP2B遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるTopo IIβ依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびTOP2B発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるTopo IIβ経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。