Plasmide Double Nickase (m) Tom1: sc-423467-NIC

La protéine Tom1 de la souris (cible de Myb1) code une protéine adaptatrice endosomale qui se lie à l’ubiquitine et recrute la machinerie associée à l’ESCRT afin de réguler le trafic et le tri des protéines membranaires ubiquitinylées. Par ses interactions avec la clathrine et des composants endosomaux, TOM1 contribue à la maturation des endosomes, à la dégradation des cargos et au contrôle du renouvellement des récepteurs, influençant ainsi l’amplitude et la durée de la signalisation. TOM1 a également été associée à la modulation des voies de signalisation inflammatoires, notamment à la régulation de l’axe IL‑1/TLR via le trafic de complexes de signalisation. Le dérèglement du transport endolysosomal et de la signalisation de l’immunité innée est pertinent pour des mécanismes de maladies neurodégénératives et immuno‑médiées, ce qui fait de Tom1 un locus utile pour disséquer ces voies dans des modèles cellulaires.

Tom1 Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Tom1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Tom1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Tom1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Tom1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.