TOB1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-423508

Panoramica

Tob1 codifica TOB1, un membro della famiglia BTG/TOB ad azione antiproliferativa che funziona come coregolatore trascrizionale a risposta immediata e modula la progressione del ciclo cellulare. TOB1 è regolato dalla fosforilazione dipendente da MAPK e interagisce con programmi trascrizionali mediati da SMAD per definire gli esiti della segnalazione del TGF-β, inclusi effetti su differenziamento e limitazione della crescita. Nelle cellule immunitarie, TOB1 contribuisce al mantenimento delle soglie di attivazione e della tolleranza attenuando l’attivazione dei linfociti T e la produzione di citochine, collegandosi così alle vie che controllano l’omeostasi immunitaria. Un’attività alterata di TOB1 è stata associata a proliferazione disregolata e a fenotipi correlati al sistema immunitario, rendendolo rilevante per studi meccanicistici sulla segnalazione oncogenica, l’infiammazione e il rimodellamento tissutale in modelli murini.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO TOB1 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Tob1 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Tob1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Tob1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina TOB1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Tob1 per lo studio della segnalazione di TOB1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Tob1 critici per la funzione di TOB1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Tob1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal TOB1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal TOB1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Tob1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal TOB1 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR TOB1 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Tob1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Tob1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.