Tns2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-411726

Panoramica

TNS2 codifica la tensina-2 (Tns2), una proteina adattatrice del citoscheletro associata alle adesioni focali che collega i recettori delle integrine alla rete di actina e organizza la segnalazione nei siti di contatto cellula–matrice. Attraverso i suoi domini modulari, Tns2 coordina l’assemblaggio e il turnover dei complessi di adesione e modula vie coinvolte nello spreading cellulare, nella migrazione e nella meccanotrasduzione, incluse la segnalazione dipendente dai fosfoinositidi e gli eventi accoppiati ai recettori tirosin-chinasici. Un’alterazione della funzione di TNS2 è stata associata a una deregolazione della segnalazione mediata dall’adesione e dell’omeostasi tissutale, con particolare rilevanza per la biologia glomerulare del rene e per l’integrità dei podociti. Queste proprietà rendono TNS2 un nodo utile per studiare la segnalazione guidata dall’adesione, il rimodellamento del citoscheletro e i cambiamenti dipendenti dal contesto nell’invasività e nella differenziazione cellulari.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Tns2 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene TNS2 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del TNS2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto TNS2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Tns2.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di TNS2 per lo studio della segnalazione di Tns2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni TNS2 critici per la funzione di Tns2
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di TNS2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Tns2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal Tns2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus TNS2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Tns2 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR Tns2 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia TNS2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio TNS2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.