Plasmide CRISPR d'Activation (h) TNF alpha: sc-400124-ACT

Le gène humain **TNF** code le **TNF alpha**, une cytokine pro-inflammatoire pléiotrope qui orchestre les réponses immunitaires innées et adaptatives via la signalisation **TNFR1/TNFR2**. Le TNF alpha active les voies canoniques **NF-κB** et **MAPK**, module les programmes apoptotiques et nécroptotiques, et favorise l’expression de molécules d’adhésion, de chimiokines et d’autres cytokines qui orientent le recrutement leucocytaire et le remodelage tissulaire. Une signalisation TNF dérégulée est impliquée dans la physiopathologie inflammatoire chronique et auto-immune, les cascades cytokiniques associées au sepsis et le dialogue au sein du microenvironnement tumoral, ce qui en fait un nœud central pour la recherche en immunologie mécanistique.

TNF alpha Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de TNF sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

TNF alpha Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus TNF dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription TNF, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de TNF alpha. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus TNF natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de TNF alpha au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie TNF alpha dans les cellules tumorales présentant une expression de TNF silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.