TNAP Lentiviral Activation Particles (m): sc-419068-LAC

Das murine Alpl-Gen kodiert die gewebsunabhängige alkalische Phosphatase (TNAP), ein über Glycosylphosphatidylinositol (GPI) verankertes Ektoenzym, das extrazelluläre Phosphatester hydrolysiert und so das Gleichgewicht zwischen anorganischem Phosphat (Pi) und Pyrophosphat (PPi) reguliert. Indem TNAP PPi begrenzt und die lokale Pi-Verfügbarkeit unterstützt, ist es ein zentraler Determinant der matrixvesikelvermittelten Mineralablagerung und der Osteoblastenreifung während der Skelett- und Zahnentwicklung. Die TNAP-Aktivität greift zudem in die purinerge Signalübertragung ein, indem sie Nukleotide dephosphoryliert, und ist am Remodeling der extrazellulären Matrix in Knochenmikroumgebungen beteiligt. Eine Fehlregulation der Alpl-/TNAP-Funktion ist mit gestörten Mineralisierungsphänotypen assoziiert und wird häufig im Zusammenhang mit Knochenfragilität, Zahndefekten und einer aberranten Kalzifizierungsbiologie untersucht.

TNAP Lentivirale Aktivierungspartikel (m) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente Alpl-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

TNAP Lentivirale Aktivierungspartikel (m) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der Alpl-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen TNAP-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen Alpl-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.