TMPIT CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-431998

概要

Tmem120aはTMPITをコードしており、TMPITは核膜および小胞体に主として局在する多回膜貫通型膜タンパク質である。TMPITは脂質代謝や細胞のメカノトランスダクション（機械刺激の情報伝達）プログラムに関与するとされている。研究により、TMPITが脂肪細胞分化や脂質貯蔵の調節に関与することが示唆されており、Tmem120aは膜脂質組成の制御や代謝恒常性に関わる経路と結び付けられている。TMPIT機能の変化は、脂肪組織生物学、肥満関連表現型、ならびに機械刺激に関連する末梢感覚機構の文脈で検討されてきた。マウスモデル系では、Tmem120aの改変は、膜関連タンパク質が代謝活性の高い組織における遺伝子発現やオルガネラ機能をどのように規定するかを解析するための手段となる。

TMPIT CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるTmem120a遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Tmem120a内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Tmem120aのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、TMPITタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、TMPITシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Tmem120a欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• TMPITの機能に不可欠なTmem120aエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Tmem120aゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• TMPIT CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびTMPIT CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Tmem120a遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  TMPIT HDRプラスミド（m）および TMPIT HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはTmem120aホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のTmem120a標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。