TMIE CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-423149

概要

マウスTmieは、内耳の有毛細胞における機械受容変換（メカノトランスダクション）装置の必須構成要素として機能する小型の膜貫通タンパク質TMIEをコードします。TMIEは、ステレオシリアにおけるMETチャネル複合体の組み立てと安定化に関与し、機械刺激を聴覚シグナルを駆動する受容器電位へと変換する過程を支えます。TMIEの破綻は、有毛束の機能を攪乱し、イオンフラックスおよび膜興奮性を変化させ、聴覚と平衡感覚に必要な感覚変換経路を損ないます。TMIE/Tmieの遺伝的欠陥は遺伝性難聴の表現型と関連しており、マウスモデルにおける蝸牛発生、有毛細胞生理、ならびに感覚ニューロン回路機能の研究において重要な標的となります。

TMIE CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるTmie遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Tmie内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Tmieのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、TMIEタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、TMIEシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Tmie欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• TMIEの機能に不可欠なTmieエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Tmieゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• TMIE CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびTMIE CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Tmie遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  TMIE HDRプラスミド（m）および TMIE HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはTmieホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のTmie標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。