TMEM70 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-412399

Panoramica

TMEM70 codifica una proteina della membrana interna mitocondriale necessaria per il corretto assemblaggio e la stabilizzazione del complesso V della fosforilazione ossidativa (ATP sintasi), supportando una produzione efficiente di ATP e l’omeostasi energetica mitocondriale. La perdita o la disfunzione di TMEM70 altera la sintesi di ATP accoppiata ai protoni, spesso causando un potenziale di membrana mitocondriale modificato, una funzione compromessa della catena respiratoria e un rimodellamento metabolico compensatorio. TMEM70 rappresenta quindi un nodo utile per studiare la biogenesi mitocondriale, la bioenergetica e il coordinamento mito-nucleare nelle cellule umane. Varianti patogene di TMEM70 sono state associate a malattie mitocondriali autosomiche recessive, inclusa la carenza del complesso V con fenotipi di encefalocardiomiopatia e scompenso metabolico, stimolando studi meccanicistici in modelli cellulari pertinenti.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO TMEM70 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene TMEM70 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del TMEM70 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto TMEM70 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina TMEM70.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di TMEM70 per lo studio della segnalazione di TMEM70, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni TMEM70 critici per la funzione di TMEM70
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di TMEM70 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal TMEM70 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal TMEM70 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus TMEM70. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal TMEM70 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR TMEM70 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia TMEM70 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio TMEM70 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.