TMEM66 Double Nickase Plasmid (h): sc-412236-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das TMEM66 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- TMEM66 Double-Nickase-Plasmid (h) und TMEM66 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf SARAF abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
TMEM66 Double Nickase Plasmid (h) | sc-412236-NIC | 20 µg | $410.00 |
SARAF (SOCE-assoziierter Regulierungsfaktor), auch bekannt als TMEM66, ist ein Membranprotein des endoplasmatischen Retikulums, das den store-operated calcium entry (SOCE) moduliert, indem es mit STIM1 interagiert und zur Ca2+-abhängigen Inaktivierung von Orai1-Kanälen beiträgt. Durch die Feinabstimmung der zytosolischen Kalziumsignalgebung beeinflusst SARAF nachgeschaltete Signalwege, die mit Genexpression, Sekretion, Stoffwechsel und Stressanpassung verknüpft sind, einschließlich der ER-Homöostase und der Dynamik der unfolded protein response (UPR). Eine Fehlregulation von SOCE und der ER-Kalziumhandhabung ist an mehreren krankheitsrelevanten Prozessen beteiligt, etwa an abweichender Proliferation, veränderter Aktivierung von Immunzellen sowie einer erhöhten Anfälligkeit für oxidativen und proteotoxischen Stress. SARAF/TMEM66 ist daher ein nützliches Ziel für mechanistische Studien, die Kalziumflüsse mit Zellschicksalsentscheidungen und der Umprogrammierung von Signalnetzwerken verknüpfen.
TMEM66 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des SARAF-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von SARAF abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die SARAF-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit SARAF-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.