TMEM65 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-406584

概要

TMEM65は、内膜ミトコンドリアの構造維持と酸化的リン酸化の支持に関与するとされる、ミトコンドリア関連膜タンパク質である膜貫通タンパク質65をコードします。TMEM65はミトコンドリアのバイオエネルギー機能、膜電位の制御、代謝ストレスに対する細胞応答に関連づけられており、ATP産生および活性酸素種（ROS）恒常性に影響を及ぼします。TMEM65機能の変化はミトコンドリア機能障害の表現型と関連して報告されており、呼吸不全が神経筋疾患や心代謝性疾患の機序に寄与し得るエネルギー需要の高い組織を対象とした研究において重要です。ミトコンドリア経路の構成要素として、TMEM65はミトコンドリアシグナル伝達、オルガネラの品質管理、ならびにストレス適応的な転写プログラムを解析するうえで有用です。

TMEM65 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるTMEM65遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、TMEM65内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、TMEM65のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、TMEM65タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、TMEM65シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、TMEM65欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• TMEM65の機能に不可欠なTMEM65エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、TMEM65ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• TMEM65 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびTMEM65 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、TMEM65遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  TMEM65 HDRプラスミド（h）および TMEM65 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはTMEM65ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のTMEM65標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。