TMEM63B CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-412530

概要

TMEM63Bは、多回膜貫通型タンパク質であるトランスメンブレンタンパク質63Bをコードしており、イオン透過性チャネル活性を介した機械感受性および浸透圧調節シグナル伝達に関与すると考えられています。膜張力や細胞容積の変化を下流のCa²⁺依存性プロセスへ結び付けることで細胞恒常性の維持に寄与し、神経細胞の興奮性、細胞骨格ダイナミクス、ストレス応答経路に影響を与えます。TMEM63Bの発現は神経系で高く、神経発達および神経精神疾患関連の表現型との関連も報告されているため、シナプス機能や感覚情報変換（感覚トランスダクション）の研究において重要です。さらに、TMEM63B活性の変化は細胞遊走や膜輸送の文脈でも検討されており、組織特異的なシグナル伝達ネットワークにおけるより広範な役割を支持しています。

TMEM63B CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるTMEM63B遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、TMEM63B内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、TMEM63Bのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、TMEM63Bタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、TMEM63Bシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、TMEM63B欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• TMEM63Bの機能に不可欠なTMEM63Bエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、TMEM63Bゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• TMEM63B CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびTMEM63B CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、TMEM63B遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  TMEM63B HDRプラスミド（h）および TMEM63B HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはTMEM63Bホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のTMEM63B標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。