TMEM63A CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-411328

概要

TMEM63A は、多回膜貫通型の膜タンパク質をコードしており、膜張力や細胞容積の変化をイオン恒常性へと結び付ける、浸透圧感受性・機械感受性イオンチャネルとして機能すると提唱されています。細胞内シグナル伝達、膜の興奮性、ストレス適応に影響するメカノトランスダクション関連の過程への関与が示唆されており、カルシウム依存性経路とのクロストークの可能性もあります。発現パターンや近年の機能解析から、浸透圧や機械的刺激が顕著な感覚生理、ならびに神経系や上皮などの文脈での重要性が示されています。膜輸送や機械感知プログラムの破綻は、神経学的疾患や恒常性維持の障害と広く関連するため、TMEM63A は細胞モデルでこれらの機構を検証するうえで有用な標的となります。

TMEM63A CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるTMEM63A遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、TMEM63A内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、TMEM63Aのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、TMEM63Aタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、TMEM63Aシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、TMEM63A欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• TMEM63Aの機能に不可欠なTMEM63Aエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、TMEM63Aゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• TMEM63A CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびTMEM63A CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、TMEM63A遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  TMEM63A HDRプラスミド（h）および TMEM63A HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはTMEM63Aホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のTMEM63A標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。