Plásmido CRISPR de Activación (h) TMEM45A: sc-412437-ACT

TMEM45A codifica una proteína transmembrana de múltiples pasos implicada en la diferenciación epitelial y la adaptación celular al estrés del microambiente, con un enriquecimiento descrito en tejidos hipóxicos y queratinizantes. TMEM45A se ha asociado con la regulación del tráfico de membranas y de programas de respuesta al estrés que influyen en la proliferación, la supervivencia y procesos relacionados con la función de barrera. Se han observado cambios transcripcionales en TMEM45A en múltiples tipos tumorales, lo que respalda su uso como gen asociado a marcadores en estudios sobre el remodelado impulsado por hipoxia y las vías de respuesta al tratamiento. Como factor localizado en membrana con expresión dependiente del contexto, TMEM45A se investiga con frecuencia por su contribución a la plasticidad de las células tumorales y a la heterogeneidad fenotípica.

TMEM45A El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de TMEM45A sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

TMEM45A El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus TMEM45A en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional TMEM45A, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de TMEM45A. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo TMEM45A y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de TMEM45A en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía TMEM45A en células tumorales con expresión de TMEM45A silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.