TMEM14B CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-418197

概要

TMEM14Bは、細胞内膜に多く局在すると予測されるマルチパス膜貫通タンパク質をコードしており、ミトコンドリアの恒常性や膜関連の代謝プロセスに関与するとされています。TMEM14ファミリーの一員として、オルガネラ動態、レドックスバランス、ならびに細胞ストレス条件下におけるアポトーシス制御との関連でしばしば研究されています。TMEM14Bの発現変動は、複数のがん種やその他の増殖性状態にまたがるトランスクリプトームのシグネチャーで報告されており、ミトコンドリア機能を細胞増殖・生存に結び付ける経路との関連が示唆されます。これらの特徴から、TMEM14Bはヒト細胞におけるミトコンドリア関連シグナルネットワークやストレス適応プログラムを解析するための有用な標的となります。

TMEM14B CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるTMEM14B遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、TMEM14B内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、TMEM14Bのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、TMEM14Bタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、TMEM14Bシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、TMEM14B欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• TMEM14Bの機能に不可欠なTMEM14Bエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、TMEM14Bゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• TMEM14B CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびTMEM14B CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、TMEM14B遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  TMEM14B HDRプラスミド（h）および TMEM14B HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはTMEM14Bホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のTMEM14B標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。