TLR9 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-400600-ACT

TLR9 kodiert den Toll-like-Rezeptor 9, einen endosomalen Mustererkennungsrezeptor, der unmethylierte CpG-Motive in mikrobieller und mitochondrialer DNA erkennt und dadurch die angeborene Immunantwort in Gang setzt. Nach Ligandenbindung signalisiert TLR9 überwiegend über MYD88 und aktiviert IRAK/TRAF6-abhängige Kaskaden, die auf NF-κB- und IRF-Transkriptionsprogramme zusammenlaufen und so die Produktion inflammatorischer Zytokine sowie Typ-I-Interferon-Antworten fördern. Dieser Signalweg beeinflusst die Reifung dendritischer Zellen, die Aktivierung von B-Zellen und die antimikrobielle Abwehr; seine Fehlregulation wird mit chronischer Entzündung und autoimmunitätsassoziierter Immunaktivierung in Verbindung gebracht. Humanes TLR9 wird daher breit erforscht, insbesondere im Kontext der Nukleinsäuresensorik, des endosomalen Traffickings und von PRR-Crosstalk-Netzwerken, die für die Immunhomöostase relevant sind.

TLR9 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen TLR9-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

TLR9 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des TLR9-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der TLR9-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen TLR9-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native TLR9-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von TLR9-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des TLR9-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem TLR9-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.