Plásmido CRISPR de Activación (h) TLR8: sc-401721-ACT

El TLR8 humano (receptor tipo Toll 8) es un receptor endosomal de reconocimiento de patrones que detecta ARN monocatenario rico en uridina procedente de patógenos y de células dañadas, iniciando la señalización de la inmunidad innata. Tras su activación, TLR8 activa cascadas dependientes de MyD88 que impulsan programas transcripcionales mediados por NF-κB e IRF, promoviendo la expresión de citocinas y quimiocinas inflamatorias y modulando la función de las células presentadoras de antígeno. La actividad de TLR8 influye en las respuestas de monocitos/macrófagos y células dendríticas, y se intersecta con vías relacionadas con el interferón y el inflamasoma que coordinan la defensa antimicrobiana. La señalización desregulada de TLR8 se ha vinculado a estados inflamatorios aberrantes y a mecanismos de enfermedades inmunomediadas, lo que lo convierte en un nodo útil para estudiar la regulación de la inmunidad innata y las interacciones huésped–patógeno.

TLR8 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de TLR8 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

TLR8 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus TLR8 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional TLR8, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de TLR8. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo TLR8 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de TLR8 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía TLR8 en células tumorales con expresión de TLR8 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.