TLR4 Double Nickase Plasmid (h): sc-400068-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das TLR4 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- TLR4 Double-Nickase-Plasmid (h) und TLR4 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf TLR4 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: TLR4: sc-293072
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
TLR4 Double Nickase Plasmid (h) | sc-400068-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
TLR4 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-400068-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Toll-like-Rezeptor 4 (TLR4) ist ein Mustererkennungsrezeptor, der bakterielles Lipopolysaccharid sowie ausgewählte endogene, gefahrassoziierte Liganden erkennt und dadurch die angeborene Immunantwort in myeloiden Zellen und Barrieregeweben in Gang setzt. Die Ligandenbindung fördert die Bildung eines Rezeptorkomplexes mit MD-2 und CD14 und aktiviert MyD88- und TRIF-abhängige Signalkaskaden, die die Transkriptionsprogramme von NF-κB, AP-1 und IRF3/7 sowie nachgeschaltete Zytokin- und Typ-I-Interferon-Antworten antreiben. Die TLR4-Signalgebung beeinflusst die Polarisierung von Makrophagen, das Priming des Inflammasoms und das Zusammenspiel mit MAPK- und JAK/STAT-Signalwegen, die gemeinsam die inflammatorische Homöostase koordinieren. Eine fehlregulierte TLR4-Aktivität wurde mit sepsisassoziierter Entzündung, autoimmunen und chronisch-entzündlichen Erkrankungen, neuroinflammatorischen Prozessen sowie dem Umbau des Tumormikromilieus in Verbindung gebracht.
TLR4 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des TLR4-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von TLR4 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die TLR4-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit TLR4-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.