Plasmide CRISPR d'Activation (h) TLR1: sc-402458-ACT

Le gène humain **TLR1** code le récepteur Toll-like 1, un récepteur de reconnaissance des motifs (PRR) qui forme un hétérodimère avec **TLR2** afin de détecter à la surface cellulaire des lipopeptides bactériens triacylés et d’autres ligands microbiens. Après activation, TLR1 transmet le signal via des cascades dépendantes de **MYD88** et **IRAK**, ce qui stimule les voies **NF-κB** et **MAPK** et induit des cytokines pro‑inflammatoires ainsi que des programmes de co‑stimulation qui façonnent l’immunité innée et adaptative. L’activité de TLR1 influence l’activation des leucocytes, la défense des barrières et la maturation des cellules présentatrices d’antigènes, en s’intégrant à des réseaux plus larges de signalisation des récepteurs Toll-like. Des variations génétiques ou une expression dérégulée de TLR1 ont été associées à une susceptibilité modifiée aux infections et à des phénotypes inflammatoires, ce qui en fait une cible pertinente pour l’étude des interactions hôte–microbe et des mécanismes des maladies immuno‑médiées.

TLR1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de TLR1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

TLR1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus TLR1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription TLR1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de TLR1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus TLR1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de TLR1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie TLR1 dans les cellules tumorales présentant une expression de TLR1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.