TLE3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-423414

概要

Tle3は、Groucho/TLEファミリーに属する転写コリプレッサーTLE3をコードしている。TLE3は、配列特異的な転写因子と協調し、クロマチン制御複合体をリクルートすることで遺伝子発現を調節する。発生や系譜決定プログラムに関与しており、特にWnt/β-カテニンおよびNotch関連の転写ネットワークにおいて重要な役割を担う。これらのネットワークでは、細胞運命の決定や分化の進行に影響を与え得る。マウス系では、TLE3は脂肪細胞の生物学や代謝関連遺伝子の制御に関与することが示されているほか、状況依存的な抑制を介して増殖や分化をより広く制御することも示唆されている。TLE3に関連する転写プログラムの破綻は、がんや発生異常のモデルで頻繁に研究されており、コリプレッサー機能の変化がシグナル伝達の出力をどのように作り替えるかを理解するために用いられている。

TLE3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるTle3遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Tle3内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Tle3のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、TLE3タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、TLE3シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Tle3欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• TLE3の機能に不可欠なTle3エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Tle3ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• TLE3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびTLE3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Tle3遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  TLE3 HDRプラスミド（m）および TLE3 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはTle3ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のTle3標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。