TLE2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-423413

概要

Tle2 は転写コリプレッサー TLE2 をコードしており、TLE2 は Groucho/TLE ファミリーに属するタンパク質として抑制的クロマチン複合体の足場（スキャフォールド）を形成し、発生および組織恒常性の過程で文脈依存的な遺伝子発現プログラムを調節します。TLE2 は配列特異的転写因子と相互作用し、Wnt/β-カテニンや Notch などの経路からのシグナルを統合することで、細胞運命決定、分化、ならびに幹細胞／前駆細胞の維持に影響を与えます。マウスモデルや細胞系では、TLE2 活性の変化が系譜（ラインエージ）指定や増殖制御を乱し得ることが示されており、発生異常やがん関連経路における転写ネットワークの破綻機構を研究する上で重要です。さらに、その核内コリプレッサー機能により、エピジェネティック制御や転写抑制ダイナミクスを解析するための有用な結節点（ノード）として位置づけられます。

TLE2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるTle2遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Tle2内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Tle2のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、TLE2タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、TLE2シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Tle2欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• TLE2の機能に不可欠なTle2エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Tle2ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• TLE2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびTLE2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Tle2遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  TLE2 HDRプラスミド（m）および TLE2 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはTle2ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のTle2標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。