TLE1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-423412

概要

Tle1 は転写共抑制因子 TLE1（Transducin-Like Enhancer of split 1）をコードしており、DNA に結合した転写因子に結合してクロマチン制御複合体を呼び込むことで遺伝子発現を調節する Groucho/TLE ファミリーの一員です。マウス細胞では、TLE1 は Notch および Wnt/β-カテニン応答性の転写プログラムにおける主要なエフェクターであり、標的プロモーターやエンハンサーを抑制することで、系譜決定、神経発生、細胞同一性の維持に寄与します。発生経路からのシグナルを統合することにより、TLE1 は細胞運命の決定、分化のタイミング、文脈依存的な増殖に影響を与えます。TLE1 に関連する転写制御の異常は、Wnt/Notch 経路のバランスやエピジェネティックな抑制が乱れる発生制御の破綻や発がん性シグナル伝達のモデルにおいて研究されています。

TLE1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるTle1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Tle1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Tle1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、TLE1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、TLE1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Tle1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• TLE1の機能に不可欠なTle1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Tle1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• TLE1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびTLE1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Tle1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  TLE1 HDRプラスミド（m）および TLE1 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはTle1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のTle1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。