TIN2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-404636

概要

TINF2は、テロメア末端を保護するシェルテリン複合体の中核構成因子であるTIN2をコードしています。TIN2はTRF1/TRF2の相互作用を組織化し、テロメラーゼのアクセスを末端保護機構と協調させることで、テロメア末端の防御に寄与します。こうした足場（スキャフォールド）機能を通じて、TIN2はテロメア長の恒常性を維持し、染色体末端で不適切なDNA損傷シグナルが生じるのを防ぐとともに、テロメア反復配列での複製に伴うストレスの制御にも関与します。TINF2の機能が損なわれるとテロメアキャッピングが破綻し、ATM/ATR依存的なDNA損傷応答が活性化され得ることから、シェルテリン機能不全がゲノム不安定性につながることが示されます。TINF2の病的バリアントは、テロメア短縮の加速と組織特異的な機能不全を特徴とするテロメア生物学的疾患と関連しており、テロメア維持機構の解明に向けた重要な研究対象となっています。

TIN2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるTINF2遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、TINF2内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、TINF2のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、TIN2タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、TIN2シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、TINF2欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• TIN2の機能に不可欠なTINF2エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、TINF2ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• TIN2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびTIN2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、TINF2遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  TIN2 HDRプラスミド（h）および TIN2 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはTINF2ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のTINF2標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。