TIMP-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-400408

概要

TIMP1は、組織メタロプロテイナーゼ阻害因子1（TIMP-1）をコードしています。TIMP-1は分泌性糖タンパク質で、マトリックスメタロプロテイナーゼ（MMP）に結合してその活性を阻害し、細胞外マトリックスのターンオーバーやタンパク質分解シグナル伝達の制御に関与します。MMP活性を抑制することで、TIMP-1は細胞—マトリックス相互作用、組織リモデリング、炎症応答に影響を与え、細胞移動、浸潤、サイトカイン駆動性のリモデリングプログラムなどに下流の効果をもたらします。さらにTIMP-1は、細胞表面での相互作用を介したMMP非依存的なシグナルにも関与し、状況依存的に生存・増殖経路を調節し得ることが示唆されています。TIMP1の発現変動やTIMP-1/MMPバランスは、線維化、関節炎、心血管リモデリング、がん生物学などで頻繁に研究されており、マトリックス動態の破綻が疾患関連の表現型に寄与すると考えられています。

TIMP-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるTIMP1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、TIMP1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、TIMP1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、TIMP-1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、TIMP-1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、TIMP1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• TIMP-1の機能に不可欠なTIMP1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、TIMP1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• TIMP-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびTIMP-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、TIMP1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  TIMP-1 HDRプラスミド（h）および TIMP-1 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはTIMP1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のTIMP1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。