TIMP-1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-400408

Visão geral

TIMP1 codifica o inibidor tecidual de metaloproteinases-1 (TIMP-1), uma glicoproteína secretada que se liga às metaloproteinases da matriz (MMPs) e as inibe, regulando a renovação da matriz extracelular e a sinalização proteolítica. Ao restringir a atividade das MMPs, o TIMP-1 influencia as interações célula–matriz, a remodelação tecidual e as respostas inflamatórias, com efeitos a jusante sobre migração, invasão e programas de remodelação mediados por citocinas. O TIMP-1 também está implicado em sinalização independente de MMPs por meio de interações na superfície celular, capazes de modular vias de sobrevivência e proliferação de modo dependente do contexto. Alterações na expressão de TIMP1 e no equilíbrio TIMP-1/MMP são frequentemente estudadas em fibrose, artrite, remodelação cardiovascular e biologia do câncer, em que a dinâmica desregulada da matriz contribui para fenótipos associados à doença.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO TIMP-1 (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene TIMP1 em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do TIMP1, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do TIMP1 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína TIMP-1.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de TIMP1 para a investigação da sinalização de TIMP-1, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) TIMP1 críticos para a função TIMP-1
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos TIMP1 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo TIMP-1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo TIMP-1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus TIMP1. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo TIMP-1 Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR TIMP-1 (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia TIMP1 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo TIMP1 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.