TIM-3 Double Nickase Plasmid (h): sc-416365-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das TIM-3 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- TIM-3 Double-Nickase-Plasmid (h) und TIM-3 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf HAVCR2 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: TIM-3: sc-517632
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
TIM-3 Double Nickase Plasmid (h) | sc-416365-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
TIM-3 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-416365-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
HAVCR2 kodiert das humane T‑Zell‑Immunglobulin- und Muzin-Domäne‑enthaltende Protein 3 (TIM‑3), einen immunregulatorischen Rezeptor, der auf aktivierten T‑Zellen, regulatorischen T‑Zellen, NK‑Zellen sowie myeloiden Zellpopulationen exprimiert wird. TIM‑3 bindet Liganden wie Galectin‑9, Phosphatidylserin, CEACAM1 und HMGB1, um die Signalübertragung des T‑Zell‑Rezeptors, die Funktion der immunologischen Synapse, die Zytokinproduktion und Zellschicksalsentscheidungen im Zusammenhang mit Erschöpfung und Toleranz zu modulieren. Durch Crosstalk mit Checkpoint‑Netzwerken und inflammatorischen Signalprogrammen beeinflusst TIM‑3 die Antigenpräsentation und Effektorantworten in Situationen chronischer Immunstimulation. Eine dysregulierte HAVCR2/TIM‑3‑Aktivität wurde mit einer veränderten Immunhomöostase in der Krebsimmunologie, bei chronischen Virusinfektionen und bei autoimmuner Entzündung in Verbindung gebracht und stellt damit einen nützlichen Ansatzpunkt für mechanistische Studien zur Immunregulation dar.
TIM-3 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des HAVCR2-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von HAVCR2 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die HAVCR2-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit HAVCR2-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.