TIEG2 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-407645-ACT

KLF11 kodiert den Transkriptionsfaktor TIEG2 (TGF-β–induzierbares frühes Gen 2), ein Krüppel-ähnliches Zinkfingerprotein, das Genexpressionsprogramme moduliert, welche den Zellzyklusfortschritt, die Differenzierung und die Apoptose steuern. TIEG2 integriert Signale aus TGF-β/SMAD-Signalwegen und kooperiert mit Chromatin- und transkriptionellen Regulatoren, um die Promotoraktivität von Wachstums- und Stoffwechselgenen zu beeinflussen. Eine veränderte KLF11/TIEG2-Aktivität wurde mit einer gestörten endokrinen und metabolischen Homöostase in Verbindung gebracht und in Kontexten wie Diabetesanfälligkeit und krebsassoziiertem transkriptionellem Remodeling untersucht. Diese Eigenschaften machen KLF11 zu einem nützlichen Knotenpunkt, um Signal-zu-Transkriptions-Mechanismen und stressresponsive regulatorische Netzwerke in humanen Zellmodellen zu analysieren.

TIEG2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen KLF11-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

TIEG2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des KLF11-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der KLF11-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen TIEG2-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native KLF11-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von TIEG2-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des TIEG2-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem KLF11-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.