Thyroperoxidase CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-423484

概要

マウスのTpoは、甲状腺濾胞細胞の頂端膜に存在するヘム依存性酵素である甲状腺ペルオキシダーゼ（TPO）をコードしており、ヨウ化物の酸化、およびサイログロブリンのヨウ素化とカップリング反応を触媒して、甲状腺ホルモンであるT3およびT4を産生する。TPO活性は、DUOX/DUOXAなどのH2O2産生系によるレドックス制御と連動しながら、ヨウ化物輸送と有機化（オルガニフィケーション）を統合し、ホルモン生合成と甲状腺濾胞の恒常性維持を支えている。Tpo依存的な甲状腺ホルモン産生の破綻は、モデル系における代謝調節の変化、成長や神経発達に関わる表現型と関連し、さらにTPOが主要抗原となる自己免疫性甲状腺病態への機序的な手がかりも与える。したがってTpoは、甲状腺の分化プログラム、内分泌フィードバックシグナル伝達、ならびに甲状腺細胞における酸化ストレス応答を研究するための機能的ハブとして位置づけられる。

Thyroperoxidase CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるTpo遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Tpo内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Tpoのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Thyroperoxidaseタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Thyroperoxidaseシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Tpo欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Thyroperoxidaseの機能に不可欠なTpoエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Tpoゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Thyroperoxidase CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびThyroperoxidase CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Tpo遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Thyroperoxidase HDRプラスミド（m）および Thyroperoxidase HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはTpoホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のTpo標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。